Институт Медицинской Климатологии
Способы выделения чистых культур микроорганизмов.

Для определения систематического положения, физиолого-биохимических свойств и особенностей развития микроорганизма необходимо получить его чистую культуру. При этом необходимо отделить клетки данного вида от клеток других видов и впоследствии исключить загрязнение культуры посторонними микроорганизмами. Выделение чистой культуры из природного образца проводят в определенном порядке. Сначала получают накопительную культуру, учитывая физиолого-биохимические особенности выделяемой культуры и создавая элективные условия для ее преимущественного развития. Например, для получения накопительной культуры микроорганизмов, способных в качестве источника азота использовать азот воздуха, следует приготовить среду без связанных форм азота. Тогда в смешанной популяции природного образца будут расти прежде всего азотфиксаторы. Чтобы избирательно подавить рост определенных групп микроорганизмов, в среду иногда вносят антибиотики. Так, для замедления развития мицелиальных грибов добавляют нистатин или гризеофульвин, а грамположительные бактерии плохо растут в присутствии пенициллина.

Разные группы микроорганизмов по-разному относятся к физико-химическим условиям культивирования (кислотности среды, температуре выращивания, освещенности и т.д.). Преобладать будет та группа микроорганизмов, для которой созданные исследователем условия культивирования наиболее приемлемы. Устойчивость эндоспор к повышенной температуре также часто используется для накопления спорообразующих микроорганизмов. Для этого пробу кратковременно прогревают при высокой температуре (10—15 мин при 80—100°С). Вегетативные клетки погибают, а эндоспоры сохраняют свою жизнеспособность. Элек­тивные условия — не всегда наилучшие (оптимальные) для роста выделяемой группы, однако сопутствующие микроорганизмы переносят их еще хуже. О преобладании желаемых микроорганизмов судят по характерной микроскопической картине, внешним изменениям среды, появлению определенных продуктов метаболизма.

Затем приступают к выделению чистой культуры. Ее можно получить из единичной клетки или из отдельной колонии. Изоляция одной микробной клетки всегда проходит под микроскопическим контролем. Одну клетку можно извлечь с помощью микроманипулятора или путем изготовления серии препаратов «висячая капля» из сильно разведенной суспензии. В первом случае клетку извлекают микропипеткой или микропетлей и переносят в сосуд со средой. Во втором случае просматривают препараты и выбирают те, в которых присутствует одна клетка. Такие препараты помещают во влажную камеру и микроскопируют вновь через сутки. Капли, в которых произошло размножение клеток, переносят в питательную среду. Данные способы получения чистой культуры пригодны только для достаточно крупных микроорганизмов, поэтому чаще используют метод выделения из отдельной колонии, разработанный в лаборатории Р. Коха. При этом каплю накопительной культуры тем или иным способом распределяют по поверхности или в глубине твердой питательной среды. В результате клетки отделяются друг от друга и впоследствии размножаются, образуя скопление клеток определенной формы (колонию). Отдельную колонию снимают петлей и переносят в сосуд с питательной средой.

Важным этапом является проверка чистоты выделенной культуры, включающая многократные пересевы и контроль характера роста и микроскопической картины. Признаком чистоты культуры является однородность колоний на определенном наборе сред. Микроскопический контроль заключается в просмотре препаратов живых клеток и фиксированных окрашенных препаратов. Чистая культура, как правило, морфологически однородна, хотя размеры отдельных клеток могут незначительно различаться.

Добавить комментарий