Институт Медицинской Климатологии
О методах стерилизации в микробиологии.

Из-за малых размеров микробов исследователь работает с популяцией, или культурой. Культура микроорганизмов, состоящая из клеток одного вида, называется чистой культурой. Если число видов два или больше, то говорят о смешанной культуре. Основными методами микробиологических исследований являются микроскопия, выделение чистых культур и контролируемое культивирование.

Наиболее распространенными и доступными являются наблюдения микроорганизмов в световой микроскоп. Препараты живых микроорганизмов представляют собой каплю жидкости с микробными клетками, заключенную между предметным и покровным стеклами. Они позволяют изучать естественную форму и сочетания клеток, а также характер их движения. Работать с иммерсионными объективами и повысить контрастность изображения позволяет специальная обработка препаратов, включающая стадии приготовления мазка, высушивания, фиксации, окраски, промывки водой и окончательного высушивания. Фиксированные окрашенные препараты можно хранить длительное время. Модификации обычной светопольной микроскопии представлены ультрафиолетовой, темнопольной и фазово-контрастной микроскопией.

Высокотехнологичными видами микроскопии, позволяющими достигать увеличений в десятки тысяч раз, являются электронная, люминесцентная, конфокальная лазерная сканирующая и атомно-силовая микроскопия. Культивируя микроорганизм в лаборатории, исследователь пытается воспроизвести условия существования его в природе с учетом выявленных метаболических возможностей микробной культуры. Для любого микроорганизма среда должна содержать питательные вещества для энергетического и конструктивного обмена в доступной для него форме. Микробиологические питательные среды подразделяются по составу на натуральные и синтетические, по физическому состоянию — на жидкие, твердые и сыпучие, по назначению — на универсальные, элективные и индикаторные. Самыми широко используемыми сосудами для культивирования являются чашки Петри, пробирки, колбы и пузырьки разной формы и размера. Для посева микроорганизмов используют три основных инструмента — микробиологическую петлю, пипетку и шприц. Пересевы микробных культур и отбор проб осуществляют стерильно около пламени газовой горелки или спиртовки. При выделении чистой культуры из природного образца сначала получают накопительную культуру, создавая элективные условия для ее преимущественного развития. Чистую культуру чаще всего получают при рассеве на твердую среду по Коху, выделяя ее из отдельной колонии. На твердых средах микробная культура может расти в виде колоний, штрихов или газона, а в жидких — в виде суспензии, микроколоний или обрастаний. Культуральные свойства и особенности морфологии колоний являются дифференцирующими признаками при определении систематического положения микроорганизма.

Длительное поддержание жизнеспособности культуры без потери ее свойств (хранение) осуществляют путем периодических пересевов, лиофилизации и хранения при сверхнизких температурах в растворе криопротектора. Для устранения посторонних организмов, которые могут загрязнять чистые культуры и способствовать искажению результатов опытов, все используемые в экспериментах материалы и инструменты должны быть простерилизованы. При культивировании и хранении используют приемы стерильной работы, обеспечивающие поддержание чистых культур. Способы стерилизации делятся на холодные (фильтрование, обработка газами и облучение) и термические (прокаливание, обжигание, сухой жар и автоклавирование). Выбор способа определяется прежде всего физико-химическими свойствами стерилизуемого объекта.

Добавить комментарий